Cellometer型号比较

Cellometer K2 荧光细胞活力分析仪

适用于复杂原代样本分析的荧光细胞计数仪

为什么选择K2?

原代细胞分析
活/死有核细胞计数
细胞实验：细胞周期、凋亡、GFP

我们的客户：

Nexcelom Customers who purchase Cellometer K2, cell viability counter

Cellometer K2 荧光细胞活力分析仪介绍

简单的操作流程

Simple, User-friendly Procedure - pipette load sample for Cellometer K2, cell viability counter

加入20 µl样本

插入计数板

选择实验点击Count

60秒内得到结果！

60秒内即可完成自动细胞计数

Cellometer X2通过明场和荧光成像以及图像识别软件迅速准确地计数细胞，并自动计算和显示细胞数、浓度、直径和存活率%。

60秒内完成上样、图片查看、

K2可以让用户：

增加通量
提高准确性
提高结果一致性
确保正确获取所有数据
分析不易计数的细胞（易成团，形状不规则等）
消除判断错误、误数和使用者之间的差异

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原代细胞分析：PBMCs, 肝细胞和其他

Cellometer K2专为原代样本分析而设计，适用样本包括外周血、脐带血、骨髓，以及其他复杂样本：

移植用有核细胞
免疫研究中的PBMCs
疫苗开发中的脾细胞
细胞治疗中的干细胞
肿瘤研究中的肿瘤悬液

通过将活的和死的有核细胞染上不同荧光，排除细胞碎片、血小板和红细胞的干扰，K2可精确计算细胞存活率。基于对“复杂”和“干净”样本的精确分析，K2可胜任在细胞处理的多个阶段（细胞收集 – 分离 – 冻存）对细胞状态进行评估。

Cellometer K2可用于分析多种细胞类型，包括：

Hepatocytes - Cellometer K2, cell viability counter

肝细胞

Jurkat

Splenocytes - Cellometer K2, cell viability counter

脾细胞

PBMC

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双荧光染色法计数活/死有核细胞

绿色荧光活细胞图片

Green fluorescent live cell image - Cellometer K2, cell viability counter

红色荧光死细胞图片

Red fluorescent dead cell image - Cellometer K2, cell viability counter

为什么用双荧光染色法？

仅凭明场下的细胞形态有核和无核细胞难以被区分，而且台盼蓝染色也没有荧光染色对活死细胞的判断灵敏，所以我们强烈建议用双荧光染色法来精确分析原代细胞。K2细胞计数仪预设了多种用AO/PI双荧光染色法来分析原代细胞的应用。

AO/PI染色法

吖啶橙(AO)是一种核酸染料，可以渗透活细胞和死细胞，将所有有核细胞染色并发出绿色荧光。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜，将所有有核的死细胞染色并发出红色荧光。当细胞被AO和PI同时染色时，由于这两种染料间的荧光共振能量转移(FRET)，所有活的有核细胞会发出绿色荧光，所有死的有核细胞会发出红色荧光。不含核的细胞或杂质不发荧光。

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细胞实验：细胞周期、凋亡和GFP

Cell Cycle

Cellometer K2可以完成多种细胞实验，比如细胞周期、凋亡和GFP蛋白表达分析。K2的数据可以导出到De Novo FCS Express流式软件进行分析和展示。

用户可以用Nexcelom Bioscience的细胞周期试剂盒对细胞进行染色并分析SubG1, G0/G1, S和G2/M等期所占的比例。用户也可以用Nexcelom Bioscience的Annexin V-FITC/PI和Caspase 3/8试剂盒来分析凋亡细胞的比例。K2还可以分析表达GFP的细胞所占的比例。

K2	SubG1	G0/G1	S	G2/M
AVE	1.0%	51.1%	13.6%	31.1%
STD	0.4%	1.6%	1.0%	1.1%

Apoptosis

Untreated (Negative Control)

	Healthy	Apoptotic	Necrotic	Debris
AVE	81.9%	8.1%	4.0%	6.0%
STD	1.6%	1.3%	0.4%	1.1%
CV	1.9%	16.1%	9.3%	18.3%

Apoptosis Positive Control - Cellometer K2, cell viability counter

Treated (Positive Control)

	Healthy	Apoptotic	Necrotic	Debris
AVE	58.8%	24.7%	13.8%	2.7%
STD	1.9%	1.1%	1.2%	0.2%
CV	3.2%	4.3%	9.0%	9.2%

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排除红细胞、血小板或细胞碎片的干扰

AO和PI均是核酸染料。因为大部分成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核，所以只有活的和死的有核细胞才会被染色发出荧光。该方法不需裂解红细胞，能帮助用户节省时间和减少实验步骤。红细胞、血小板和细胞碎片都会在计数时被排除。

荧光染色法计数原代细胞的优势

右边的细胞图片显示了荧光染色法计数原代细胞的优势。明场图片显示了该样本中的有核细胞以及混杂的红细胞和血小板。不过在红色和绿色荧光通道中我们只能看到有核的活/死细胞。

Sample	Measurement	Total nucleated	All	RBC	% RBC	n
PBMC+RBC	Mean	1.26E+07	1.39E+07	1.23E+06	8.9%	10
	CV	6.2%	8.8%
PBMC+1/2RBC	Mean	1.21E+07	1.27E+07	5.82E+05	4.6%	10
	CV	4.8%	5.4%
PBMC+1/4RBC	Mean	1.22E+07	1.24E+07	2.27E+05	1.8%	10
	CV	7.9%	7.3%

将不同数量的红细胞与新鲜的人PBMC混合。在明场通道中计数细胞总数(有核细胞 + 红细胞)；在绿色荧光通道中计数有核细胞。不同浓度的红细胞(1.8%, 4.6%和8.9%)没有影响有核细胞的计数。

Fresh human PBMCs - Cellometer K2, cell viability counter

红细胞在明场图片中被标识出来(左图)；荧光图片只显示发荧光的有核细胞，不显示红细胞(右图)。

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细胞图像可用于数据确认

没有完全相同的两个细胞

用户可通过K2的明场通道查看细胞的形态。

被圈定的细胞图片可用于确认图片的获取和分析是否正确。明场图片可用于普通细胞计数和台盼蓝存活率分析。

被圈定的荧光图片显示被计数的有核活/死细胞，可用于确认原代细胞的分析是否准确。

用户可确认：

基于大小和形态判断细胞计数是否准确
成团细胞计数是否精确
红细胞、血小板、碎片是否被排除

Bright field counted cell image for Data Verification - Cellometer K2, cell viability counter

Fluorescent counted cell image for Data Verification - Cellometer K2, cell viability counter

明场图片可用于确认粘连的细胞是否都被计数以及碎片是否被排除。在荧光图片中，被计数的活细胞用绿圈标出，被计数的死细胞用红圈标出。

细胞图片可被保存和导出并用作文献发表和演示
保存的图片可以用默认或自定义参数重新分析

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Cellometer分析原代肝细胞的方法

因为肝细胞的形态不均一、脆弱、易成团，用血球计数板人工计数肝细胞耗费精力且不准确。而且肝细胞的存活率下降很快，如果计数时间太长会导致结果的不准确和不一致。除此以外，肝细胞的质地很脆弱，不能承受鞘液的压力，所以也不适合用流式细胞仪分析。因此，Cellometer图像细胞仪是肝细胞分析的最佳仪器。

双荧光染色步骤

分析存活率时，将20 µl肝细胞样本和20 µl Cellometer AO/PI染料混合。吖啶橙(AO)与DNA结合发出绿色荧光，将肝细胞和碎片区分开。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜，和死细胞的DNA结合发出红色荧光。当细胞同时被AO和PI染色时，由于FRET (荧光共振能量转移)效应，死细胞中AO发出的绿色荧光被PI吸收，所以死的肝细胞发出红色荧光，活的肝细胞发出绿色荧光。这个染色过程简单、快速，结果准确。